Pamata padomi šūnu kultūru kriokonservēšanai

Pamata padomi šūnu kultūru kriokonservēšanai

Šūnas turpina metabolismu normālu augšanas darbību laikā, kam nepieciešama dažādu proteāžu līdzdalība. Kad temperatūra pazeminās zem -70 ° C, proteāzes pārstāj darboties. Tāpēc vidē ar ārkārtīgi zemu temperatūru šūnas var apturēt metabolisma aktivitātes un iekļūt pasīvā stāvoklī, kas ļauj ilgstoši uzglabāt.

1. Eksperimentālie materiāli

Bāzes materiāls:

Pamata barotne

Serums (parastais FBS/NBS)

Ultrapure Workbench

Sterils dimetilsulfoksīds (DMSO)

Sterils PBS fosfāta buferšķīduma šķīdums

Pipetes pistole

Elektriskais pipetēšanas lielgabals

Eksperimentu sagatavošana

a) sasalšanas šķīduma sagatavošana:

Vispārējās šūnas: 55% pamata barotne + 40% liellopu serums (FBS/NBS) + 5% DMSO

Vitālās šūnas: 90% liellopu serums (FBS/NBS) + 10% DMSO

Alikvots sagatavotais kriokonservācijas šķīdums 15 ml centrifūgas mēģenē [ligzda] un uzglabā 4 ° C vēlākai lietošanai.

(b) Saldētu šūnu sagatavošana:

Pirms šūnu sasaldēšanas atlasiet šūnas ar labu augšanas stāvokli un logaritmiskās augšanas fāzē un nomainiet tās ar svaigu vidi 12–24 stundas pirms sasalšanas, lai saglabātu šūnas stāvokli.

2. Eksperimentālā procedūra

1. Ievērojiet sasaldējamo šūnu blīvumu, kas ir aptuveni 80%~ 90%. Izmantojiet pipetes pistoli, lai aspirētu veco barotni, pievienotu sterilu PBS, lai šūnas mazgātu 1-2 reizes un noņemtu atlikušo barotni kultūras vidē.

2. Pievienojiet atbilstošu daudzumu tripsīna vai gremošanas sulas, lai tripsīns varētu iekļūt šūnās, un ievietojiet tos inkubatorā gremošanai. Ievērojiet šūnu stāvokli zem mikroskopa: citoplazma ievelk un šūnas vairs nav savienotas loksnēs. Šajā brīdī pievienojiet apturēšanas risinājumu, lai apturētu gremošanas procesu.

3. Viegli burbuļojiet šūnas ar galu, lai veidotu šūnas suspensiju un centrifugē šūnu suspensiju pie 1000 apgr./min 3-5 minūtes.

Izmetiet supernatantu, pievienojiet atbilstošu sasalšanas šķīduma daudzumu un maigi pipeti, lai šūnas vienmērīgi skaitītu skaitīšanu. Pielāgojiet šūnu blīvumu ar kriokonservācijas barotni, lai galīgais blīvums būtu 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Izmantojiet pipetes pistoli, lai atdalītu kriogēnās caurules atbilstoši paredzamajai jaudai, un izmantojiet automātisku apvalka mašīnu, lai vāciņos un aizzīmogotu.

5. Standarta kriokonservācijas programma ir dzesēšanas ātrums no -1 ° C līdz -2 ° C/min, un šūnas, kas sasaldētas 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (nakti) → ilgtermiņa uzglabāšana šķidrā slāpeklī.

To var arī uzglabāt tieši saldētavā -80 ° C nakti un pēc tam uzglabāšanai pārnest uz šķidru slāpekli.

Yongyue Medical ir augsto tehnoloģiju uzņēmums, kas specializējas pētniecībā un attīstībā, biomedicīnas palīgmateriālu ražošanā un pārdošanā. Pipetu padomi, pipetes, PCR plāksne, šūnu kultūras produkti un citi bioloģiskās laboratorijas palīgmateriāli. Yongyue medicīniskais ir jūsu uzticības un izvēles cienīgs! Laipni lūdzam konsultēties!