Detalizēts reaģenta iztvaikošanas skaidrojums PCR eksperimentos

Detalizēts reaģenta iztvaikošanas skaidrojums PCR eksperimentos.

PCR eksperimentā pēc reakcijas sistēmas pievienošanas mēs uzmanīgi pārklājam vāku un atkārtoti apstiprinām, ka vāks ir aizvērts, lai izvairītos no reaģenta iztvaikošanas. Bet dažreiz mums ir arī šaubas: mēs esam apstiprinājuši, ka vāks ir cieši aizvērts, bet pēc eksperimenta pabeigšanas reaģents joprojām iztvaiko. kāds ir iemesls?

Faktiski reaģenta iztvaikošana ir viena no visbiežāk sastopamajām PCR eksperimentiem, un ir daudz faktoru, kas ietekmē reaģenta iztvaikošanu.

Iztvaikošana attiecas uz to, ka PCR eksperimenta laikā reakcijas šķīdums iztvaiko augstā temperatūrā un pēc tam kondensējas uz pudeles sienas vai augšējā pārsega, veidojot ūdens miglu vai ūdens pilienus, vai tieši pārplūst no pudeles vāciņa vai plēves gaisa spraugas, kā rezultātā rezultātā iegūstot gaisa spraugu, iegūstot gaisa spraugu, iegūstot gaisa spraugu, iegūstot gaisa spraugu, kas izriet mainot reakcijas šķīduma koncentrāciju. Izmaiņas, reakcijas šķīduma daudzums samazinājās, un daži pat iztvaikoja līdz sausumam, kā rezultātā tika veikti nederīgi eksperimenti.

1. Karsts vāka spiediens, temperatūra

PCR eksperimentos mēs parasti sildām vāku, lai novērstu reaģenta tvaiku kondensāciju. Karstā vāka temperatūra parasti ir augstāka nekā reakcijas šķīdumā, lai novērstu tvaiku kondensāciju.

Termiskā ciklera sildīšanas vākus var aptuveni sadalīt šādos četros veidos: nekontrolējami sildīšanas vāki, regulējami sildīšanas vāki, adaptīvie sildīšanas vāki un automātiski sildīšanas vāki. Pielāgojamam apsildāmam vākam ir pirkstu necaurlaidīga saspiešana. Ja netiks stingri pievilkts, reaģenti iztvaiko. Malas iztvaikošanu var samazināt līdz minimumam, palielinot spiedienu uz apsildāmo vāku. Dažreiz pārņemšana var saspiest cauruli un sagriezt pogu. Normālos apstākļos elektriskā viedā apkures pārsegs var automātiski noteikt dažādu augstumu palīgmateriālus, automātiski saspiest palīgmateriālus, un spiediens ir vienmērīgs un nemainīgs, tādējādi samazinot reaģenta iztvaikošanu un manuālās kļūdas, kā arī uzlabojot eksperimentālo precizitāti un atkārtojamību.

2. Palīgmateriālu deformācija

Tvaika noplūdēm vairums cilvēku domā, ka ar karsto vāka spiedienu nepietiek. Karstā vāka spiediens ir ļoti svarīgs, bet tas ir tikai viens aspekts. Faktiski ļoti svarīgi ir arī palīgmateriāli.

PCR atveres plāksnes parasti ir izgatavotas no plastmasas materiāliem, kas pēc karsēšanas ievērojami izplešas un deformējas. PCR metāla pamatnes termiskās izplešanās ātrums, ko izmanto PCR atveres plāksnes novietošanai, ir ārkārtīgi zems, un PCR atveres plāksne nevar normāli izplesties gar plakni pēc termiskās izplešanās. Izliekšanas stāvoklis padara augšējo siltuma pārklājumu nespēj pilnībā saskarties ar PCR atveres plāksnes virsmu, kā rezultātā rodas nevienmērīga temperatūra un spiediens, izraisot reaģenta iztvaikošanu PCR atveres plāksnes malā un ietekmējot PCR noteikšanas efektu.

3. Palīgmateriāli nav cieši noslēgti

Termiskā vāka un palīgmateriālu necaurlaidība nenozīmē, ka PCR caurules vāciņš ir cieši aizvērts, un PCR urbuma plāksnes kvalitāte ir nevienmērīga. Augstas kvalitātes palīgmateriāli, sprauslas virsma un pārsegs ir gluds, un blīvējums aiz kastes pārsega ir labs, un to nav viegli noplūst. Zemākām palīgmateriāliem ir nevienmērīgas snīpas un radiālas līnijas, kas var viegli izraisīt noplūdi vai pat izžūt.

Tāpēc PCR eksperimentos mēģiniet izvēlēties augstas kvalitātes un piemērotus palīgmateriālus. Tajā pašā laikā reakcijas sistēmu var paplašināt, lai samazinātu sistēmas iztvaikošanas ietekmi uz reakciju.