Blīvēšanas un piesārņojuma problēmas vairāku dienu šūnu kultūras plāksnēs

Daudzviļņu šūnu kultūras plākšņu iekraušana un apstrāde:

Šūnu kultūras plāksne seko arī stingras asepsis principam, veicot šūnu operācijas. Visām operācijām jābūt standartizētām un zinātniskām, un tās neizraisa papildu ietekmi uz šūnu augšanu. Visizplatītākā problēma ir, kā nodrošināt šūnu vienveidību pēc parauga pievienošanas un samazināt barotnes maiņas ietekmi uz šūnu augšanas stāvokli.

jautāt:
96 un 24 iedobju kultūras plākšņu vai Petri ēdienu vāki ir ļoti vaļīgi, kas ir ērti ventilācijai, bet vai arī baktērijas, pelējums un citi piesārņotāji ieslīd?

Atbilde:
Vāks ir ļoti vaļīgs, kas pieder daļēji atvērtajai kultūrai, un tā mērķis ir ventilēties (patiesībā tas ir CO2 pagatavošana ārpus kultūras ēdiena pilnībā apmainīties ar kultūras trauku un saglabāt kultūras pH vērtību vidējs).
Visam ir priekšrocības un trūkumi, kas, protams, palielina piesārņojuma iespēju. Turklāt tas izraisa šķidruma trauku iztvaikošanu, kas ir ievērojams ar precīzu narkotiku dozēšanu. Tāpēc ir nepieciešami šādi divi pasākumi: a. Gaisam inkubatorā jābūt tīram (regulārai ultravioletai gaismai, spirta tīrīšanai, un inkubators ir jāatver un jāaizver pēc iespējas mazāk) b. Inkubatora mitrums vienmēr jāuztur 100% (izlietne ar sterilu destilētu ūdeni, kas ievietots inkubatorā).
Tāpat kā Petri trauks, tas ir arī konteiners ar apgrieztu vāku, un tas netiks piesārņots. Galvenokārt tāpēc, ka gaisa plūsmas negatīvais spiediens, ko rada apvalka "L" mala, ir mikroorganismi, kas piestiprināti pie putekļiem, un gaisa plūsmas pārvadātie putekļi nevar iziet cauri pārsega malai, kas rada negatīvu spiedienu. Ventilācijas efekts notiek tikai ar gaisa difūziju, un netiks ģenerēta gaisa plūsma, tāpēc tā tikai elpos un neietilpst baktērijās.

jautāt:
Izmantojot 24 iedobju plāksni, dažās akās notiek operācijas (īpaši tīrā stenda), un citās iedobēs ir šūnas. Es uztraucos, ka tas izraisīs piesārņojumu. Es nezinu, kam pievērst uzmanību?

Atbilde:
Ja darbība tiek standartizēta īpaši tīrā stenda solā, tai jābūt ok. Es domāju, ka jūs varat pilnībā izmantot kultūras plāksnes vāku, mēģināt atklāt tikai operējamos caurumus un pārējos caurumus aptvert ar pārsegiem.
Pirms lietošanas apsveriet visaptverošu un pilnībā izmantojiet visus caurumus; Ja jums ir jāizmanto tikai daži caurumi, varat izmantot tikai vienu pusi un pārējo pārklāšanu ar pārsegu. Es vispirms esmu pieradis izmantot pareizo caurumu (labajai rokai ir ērti pievienot paraugus).

Darbojoties, izmantojiet dažus stikla slaidus, lai paceltu vienu dēļa pusi, pilnībā neatveriet vāku, parasti nav problēmu.
Nevienmērīgs šūnu sadalījums un risinājumi

jautāt:
Šūnas tiek inokulētas uz kultūras plāksnes, un šūnas vienmēr pulcējas perifērajā daļā, kā ar to rīkoties?

Atbilde:
Vai drīkstu jautāt, kā jūsu šūnas tiek sajauktas? Vai tas pipetē vai kratot kultūras plāksni? Ja tas ir pēdējais un ja tas tiek satricināts aplī, ļoti iespējams, ka šūnas tiks izmestas perifērajā daļā centrbēdzes spēka dēļ, kā rezultātā vidū būs mazāk šūnu. Vairāk nekā četras nedēļas!
Šeit ir labs veids: pirms sēklu plāksnes kultivēšanas ievietojiet kultūras plāksni inkubatorā uz dažām piesātinājuma stundām un pēc tam izņemiet to. Stādot šūnas, spēkam jābūt gaismai. Lēnām pievienošana ļauj šūnu suspensijai ieplūst plāksnes iedobēs, un kultivētās šūnas pamatā aug vienmērīgi. Atcerieties nekad nekratīt ar kratītāju, pretējā gadījumā jūsu šūnas saliks kopā, kā jūs teicāt.
Jo mazāks kultūras plāksnes cauruma diametrs, jo acīmredzamāka ir šī parādība. Šī parādība ir neizbēgama 24 un 96 iedobju plāksnēm, jo ​​šķidrums pielīp pie sienas tā, ka kultūras šķīdums urbumā neveido šķidruma līmeni, bet perifērija ir augsta, tāpat kā ieliekts spogulis. Tomēr, izmantojot šos divus atveres plāksnes veidus, nav iespējams pievienot pietiekamu daudzumu kultūras šķīduma, jo ir nepieciešama papildu iejaukšanās, lai šūnas kopā ar kultūras šķīdumu parādītos "malu savākšana". Tas ir atkarīgs no tā, kādi rādītāji jums jāievēro. Ja tas ir MTT, imūnhistoķīmija ietekmēs rezultātus šūnu slāņošanas dēļ.
Sagriezot šūnas, vienmērīgi pievērsiet uzmanību pipetēšanai, lai izvairītos no šūnu salipšanas, un kultūras šķīduma daudzumam jābūt pietiekamam. Parasti inokulējot pievienojiet pietiekami daudz kultūras risinājuma, un, pievienojot intervenci, vienreiz mainiet risinājumu. Intervences risinājumam pievienotā kultūras risinājuma daudzums ir vienāds ar kultūras risinājuma daudzumu inokulācijas laikā, šajā gadījumā tiks uzlabota "malu komplekta" parādība, tāpēc jūs varētu arī izmēģināt to.

jautāt:
Tas, ko es izdarīju, bija plāksnes veidošanās eksperiments. Vislabāk ir izplatīt šūnas vienveidīgā slānī. Lielākā daļa caurumu ir labi, ja vīruss tiek inokulēts, un daži no tiem nav vienādi. Šūnu grupā ir lielas atšķirības. Es gribētu pajautāt, kādu metodi izmantojat, pievienojot šūnas?

Atbilde:
Pēc gremošanas ir svarīgi pipetei šūnas vienas šūnas suspensijā! Pārliecinieties, ka šūnu skaits katrā iedobē ir konsekvents, sadalot plāksni!
Protams, ir arī apstrādes faktori. Ļoti svarīga ir arī paralēlisms starp akām. Piemēram, pievienojot zāles, sajauciet zāles pēc atšķaidīšanas, lai pārliecinātos, ka katras iedobes koncentrācija ir konsekventa!
Turklāt, pievienojot šūnas un zāles, testa grupa un kontroles grupa pēc kārtas jāpievieno, lai izvairītos no atšķirībām šūnu blīvumā un zāļu koncentrācijā, ko izraisa paraugu pievienošanas secība!

jautāt:
Pūšanās jau ir vienveidīga, bet dēļi, 6 caurumi un 24 caurumi vienmēr ir nedaudz nevienmērīgi un nedaudz koncentrēti pa vidu. Turklāt ir acīmredzams, ka skaitīšana tiek veikta, un pēc dienas vai divām katra cauruma blīvums ir atšķirīgs, kas ietekmēs noteikšanu. Vai ir labs ceļš?

Atbilde:
Ja jūs izmantojat pasteur pipeti, katru reizi pārāk daudz nepieredzējiet, jo pipetes šūnas automātiski nogrims, bieži vien šūnu skaits pirmajās caurumos ir lielas, un šūnu suspensija bieži ir vienāda, un šķidrums būs Sekojiet S-formas maršrutam.
Ja izmantojat pipeti, padomi jāapstrādā un jānoņem, lai izvairītos no šūnu bojājuma, lai katru reizi, kad šķidrums tiek ņemts, atbilst akai. Precīzāk ir pievienot viens pret vienu caurumu ar galu. Bet arī pievērsiet uzmanību apturēšanas sajaukšanai.

Lai iestatītu paralēlu grupu, N jābūt pietiekami lielai (jūs varat to aprēķināt).

Pēc galvanizācijas nekratiet, jo kratīšana izraisīs šūnu apkopošanu centrā. Vislabāk ir vienreiz apmelot.

Porainas šūnu kultūras plāksne Yongyue Medical vienmēr ir uzskatījusi kvalitātes kontroli par uzņēmuma dzīvi un turpinājusi pastāvīgu uzņēmuma konkurētspējas uzlabošanu. Uzņēmums vienmēr ievēro likumu un noteikumu pakļaušanas uzņēmuma garam, stingri izturoties pret pašdisciplīnu, ir saudzīgs un uzdrīkstējies uzņemties atbildību par darbības standartu, saglabājot un paplašinot tirgu ar izcilu kvalitāti un izcilu servisu, kā arī izpildot šo klientu vajadzības vislielākajā mērā. Apvidū Abpusēji abpusēji izdevīgi ir mūsu attīstības mērķis. Yongyue medicīniskais! Jūsu uzticamais partneris. Mēs esam gatavi sirsnīgi sadarboties ar jums, lai radītu labāku nākotni.